DETERMINACIÓN DE LIPIDOS EN DIFERENTES MATRICES

RESUMEN 

Los lípidos, constituyen los principales componentes estructurales de los alimentos. Se definen como un grupo heterogéneo de compuestos que son insolubles en agua y  solubles en disolventes orgánicos tales como éter, cloroformo, benceno o acetona. Algunos lípidos pueden ser solubles en disolventes relativamente polares. El contenido total de lípidos se determina comúnmente por métodos de extracción con disolventes orgánicos.  El método Bligh Dyer  se basa en la homogeneización de alimentos húmedos con metanol y acetona en proporciones tales que forman una fase sencilla miscible con el agua en los alimentos, que al adicionar posteriormente acetona y agua se separan dos fases con los materiales lípidos en la capa de acetona.

ABSTRACT 

Lipids are the main structural components of food. They are defined as a heterogeneous group of compounds that are insoluble in water and soluble in organic solvents such as ether, chloroform, benzene or acetone. Some lipids may be soluble in relatively polar solvents. The total lipid content is commonly determined by extraction methods with organic solvents. The Bligh Dyer method is based on wet food homogenization with methanol and acetone in proportions to form a miscible single phase water in food, that adding acetone and then water separating two phases with lipid materials in the acetone layer.

INTRODUCCIÓN  

En esta práctica realizaremos la extracción de lípidos, que son biomoléculas orgánicas formadas básicamente por carbono e hidrógeno y generalmente también oxígeno; pero en porcentajes mucho más bajos. Además pueden contener también fósforo, nitrógeno y azufre, es un grupo de sustancias muy heterogéneas que sólo tienen en común estas dos características, son insolubles en agua, son solubles en disolventes orgánicos, como éter, cloroformo, benceno, y la técnica que utilizaremos  para la extracción es la de soxleth, se utiliza para realizar procesos de extracción solidó-liquido, extracción de principios activos tanto en el área de productos naturales como en especies, condimentos, fitomedicinas, purificación de productos biofamacéuticos y en diversos procesos industriales donde intervienen operaciones de extracción liquido-liquido, en Campos como el de los Perfumes y sabores. O por el método de Bligh y Dyer, se basa en la homogeneización de alimentos húmedos con metanol y cloroformo en proporciones tales que forman una fase sencilla miscible con el agua en los alimentos, que al adicionar posteriormente cloroformo y agua se separan dos fases con los materiales lípidos en la capa de cloroformo. Y así optemos la grasa de un alimento homogeneizado mediante extracción directa con disolventes en frío.

METODOLOGIA 

Para el        MÉTODO DE BLIGH DYER lo que se hizo fue pesar 10 gr de harina y 20 mL de Etanol, se procede a agitar durante 10 minutos homogeneamente, se le agrega 10 mL de cloroformo y se agita nuevamente durante 5 minutos, despues de esto se le agrega 10 mL de agua y se agita durante otros cinco minutos. 

Luego de esto se procede a pasar la muestra a una probeta y se deja reposar, ahi se evidencian dos fases. 

La fase inicial se extrae con una pipeta y se lleva a evaporar hasta conseguir una pasta, luego se lleva a la estufa a 150°C durante unos minutos y luego se pesa la muestra restante. 

Para el  MÉTODO SOXLETH se pesan 10 gr de leche en polvo, se hace un cono con papel filtro y se pone en el tubo de extraccion aparte de esto se le adiciona 300mL de eter de petroleo o benceno al matraz. 

ANALISIS Y RESULTADOS 

Los lípidos, junto con las proteínas y carbohidratos, constituyen los principales componentes estructurales de los alimentos.

·         MÉTODO SOXLETH

En este método el disolvente se calienta, se volatiliza y condensa goteando sobre la muestra la cual queda sumergida en el disolvente. Luego, éste es sifoneado al matraz de calentamiento para empezar de nuevo el proceso. Antes de este paso, no dejar el balón seco porque podría quemar el procedimiento.

% de grasa cruda= 51.16 - 46.8/ 10  x 100  = 43,6 %

Donde m= peso de la muestra          

m1= tara del matraz solo         

m2= peso del matraz con grasa

Se ha determinado que la cantidad de grasa contenida en la muestra de harina hay un contenido de grasa cerca del 43,6 % por ciento del contenido total de proteínas, carbohidratos y grasas. Se disolvieron 56 ml de grasa con el procedimiento de soxleth.

·        

      MÉTODO DE BLIGH DYER

El método se basa en la homogenización de la muestra con cetona, etanol y agua en  proporciones tales que se forme una sola fase miscible con el agua de la muestra.

% de grasa cruda =48,20-48,23/10x100=0,3%  humedad                                                                         

Donde m= peso de la muestra          

m1= crisol solo         

m2= peso del sobrante  

Se lograron dos fases, material graso se encontró en la fase no acuosa y mientras el material no graso se encontró en la fase acuosa. Se tomó un color amarillo al  calentarse y evaporarse.

Para la determinación de grasas de la harina, se ha utilizado un baño termostatado para la evaporación de la centona y el etanol, cuya ebullición fue de 40º C, lo que permite que no se desnaturalice las grasas contenidas en el alimento. 

CONCLUSIONES

• El análisis de LIPIDOS se enfrenta a nuevos retos que exigen la aplicación de técnicas de separación más sofisticadas para obtener datos que permitan conocer mejor la composición de los alimentos y el metabolismo de sus componentes en los seres vivos.

BIBLIOGRAFIA 

1.      A.O.A.C. Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 12 th edition. W. Horwitz, editor. Washington. USA. 1975. Pp. 458-517.

2.      Egan, H.; Kirk, R.S. y R. Sawyer. Analisis Quimico de alimentos de pearson. Compañía Editorial Continental, S.A. México. 1987.

3.      Mehlenbacher, V.C. Analisis de grasas y aceites. Editorial URMO. España.1979.

ANEXOS

 

EXTRACCIÓN DE CARBOHIDRATOS POR MÉTODO CUALITATIVO CON DIFERENTES REACTIVOS 

RESUMEN 

Contienen en sus moléculas Carbono, Hidrógeno y oxígeno. Son sustancias cristalinas, dulces y solubles en agua. Son la principal fuente energética en la alimentación humana. Los carbohidratos se clasifican según el numero de azucares bases o glucidos qu constituyen su estructura en monosacaridos, disacáridos, oligosacaridos y polisacáridos. Cabe mencionar que los azucares son de suma importancia como lo es la desoxirribosa del ADN y ribosa ARN, otros que son estructuras de membrana que pueden estar acoplados a proteínas, Pero para la separación de mezcla de carbohidratos utilizamos:

•  reacción de molishch.
•  reacción de fehling
•  reacción de seliwanoff.

Se logró identificar os carbohidratos reductores mediante su coloración rojiza y los comportamientos de los carbohidratos, su manera de reacción y coloración.  

ABSTRACT

The carbohydrates also so called sweeten, they are carriers of great quantity of energy, contain in his molecules Carbon, I hydrogenate and oxygen. They are crystalline, sweet and soluble substances in water. They are the principal energetic source in the human supply. The carbohydrates qualify according to the number of sweeten bases or glucidos qu constitute his esctrucura in monosaccharides, disacaridos, oligosacaridos and polysaccharides. It is necessary to mention that you sweeten they perform supreme importance like it it is the desoxirribosa of the DNA and ribosa ARN, others that are membrane structures that can be connected to proteins, But for the separation of mixture of carbohydrates we use:

•  reaction of molishch.
•  reaction of fehling
•   reaction of seliwanoff.

Be it achieved carbohydrates identified you reducers by means of his reddish coloration and the behaviors of the carbohydrates, his way of reaction and coloration.

PALABRAS CLAVES 

Monosacaridos 
Disacaridos
Carbohidratos 
Grasas
Proteinas
Polioles
Polisacaridos 

INTRODUCCIÓN

 En esta práctica realizaremos la extracción de carbohidratos, que  son unas biomoléculas que también toman los nombres de hidratos de carbono, glúcidos, azúcares o sacáridos; aunque los dos primeros nombres, los más comunes y empleados, no son del todo precisos, ya que no se tratan estrictamente de átomos de carbono hidratados, pero los intentos por sustituir estos términos por otros más precisos no han tenido éxito. Estas moléculas están formadas por tres elementos fundamentales: el carbono, el hidrógeno y el oxígeno, este último en una proporción algo más baja,y para identificarlos utilizaremos diferente reactivos como; el de Fehling, también conocido como Licor de Fehling, es una disolución que se utiliza como reactivo para la determinación de azúcares reductores, sirve para demostrar la presencia de glucosa, así como para detectar derivados de ésta tales como la sacarosa o la fructosa, reacción del Lugol, este método se usa para identificar polisacáridos, reacción de Molish, está basada en la formación de furfural o derivados de éste a partir de los carbohidratos, que se condensan con el alfa-naftol, dando un producto violeta, reacción de Bial, es característica de pentosas y está basada en la formación de furfural a partir de pentosas y posterior condensación con el floro glucinol dando un color rojo verdoso (Cereza), reacción de Seliwanoff, para diferenciar cetosas de aldosas; aunque ambas dan la reacción, las cetosas la dan rápidamente y las aldosas lentamente, está basada en la formación de durfural o en un derivado de éste y su posterior condensación con el resorcinol dando un color rojo fuego para cetosas y rosa para aldosas. Con el fin de identificar cada uno de ellos según su clasificación  por número de átomos de carbono triosas, tetrosas, pentosas, hexosas y heptosas.

METODOLOGÍA

REACCIÓN DE FEHLING

Para esta reacción en un tubo de ensayo  se tomo 3mL de la muestra a analizar que en este caso fue ( almidón, bebida hidratante, bebida light, zumo de limon)  1mL de Fehling A y 1mL de Fehling B en un tubo de ensayo y se calentó en baño maría. 

REACCIÓN DEL LUGOL 

Se hizo el mismo procedimiento de la reacción anterior, pero a diferencia es que a este se le añadieron unas gotas de lugol. 

REACCIÓN DE MOLISH

Son las mismas muestras a analizar, solo que acá se le agrega 3 gotas de  reactivo de Molish y 2 mL de ácido sulfúrico , y en este en cada una de las muestras se debe formar un anillo de color purpura para demostrar que la prueba fue positiva. 

REACCIÓN DE SELIWANOFF

Con las muestras anteriormente mencionadas se trabaja para este reactivo, se  le agrega 2mL de ácido clorhídrico y se pone a baño maria por 4 o 5 minutos, para que la prueba sea positiva debe dar un color rojo cereza precipitado 

RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS 

FELHING A Y B

Este reactivo, reacciona principalmente con los aldehídos porque tienen un grupo carbonilo más expuesto que le da el carácter reductor y existe la presencia del precipitado rojo ladrillo (óxido cuproso) que indica una prueba positiva. La prueba de Felhing nos permite identificar cual es un azúcar reductor. La mayoría de los monosacáridos y algunos disacáridos poseen poder reductor.

ALMIDON: cuando se inicio  la reacción el precipitado era de un color azul muy claro, luego de ponerlo a baño maría dio un precipitado verde,  lo cual es prueba negativa, pese a que el almidón está contaminado por mala manipulación dentro del laboratorio.

SACAROSA: cuando se  inicio la reacción  era de color azul oscuro, luego de ponerlo a  baño maría se puso de color verde con precipitado color naranja lo cual da prueba  positiva.

FRUCTOSA: cuando se  inicio la reacción  era de color azul oscuro, luego de ponerlo a baño maría se puso de color naranja con precipitado amarillo ladrillo  y esto quiere decir que la prueba es positiva.

GLUCOSA: cuando se  inicio la reacción  era de color azul oscuro, luego de ponerlo a  baño maría adquirió una coloración verde con un precipitado naranja la prueba fue positiva.

BEBIDA HIFRATANTE: cuando se  inicio la reacción  era de color azul oscuro, luego de ponerlo a baño maría adquirió un color marrón, la prueba se designo positiva.

LIMON: cuando se  inicio la reacción  era de color azul oscuro, luego de ponerlo a baño maría adquirió un color amarillo ladrillo lo cual es prueba positiva.

BEBIDA LIGHT: se  inicio la reacción  era de color azul claro, luego de ponerlo a baño maría el precipitado no cambio siguiendo de color azul claro, lo cual es prueba negativa. 

REACCION DEL LUGOL.

El color que dan los polisacáridos con el lugol se debe a que el I2 ocupa espacios vacíos en las hélices de la cadena de unidades de glucosa, formando un compuesto de inclusión que altera las propiedades físicas  del polisacárido, especialmente la absorción lumínica. Esta unión del I2 a la cadena es reversible y debido al calentamiento desaparece el color, que al enfriarse reaparece. El lugol da con el almidón color azul y con el glucógeno color rojo caoba.

PAPA: Se toma un trozo de muestra de  papa y se adiciona lugol, luego de 20 a 30 segundos aproximadamente, se observó la formación de un precipitado color azul ya que se oxidaba lo cual indica que es prueba positiva para el reactivo del lugol.

REACCION DE MOLISH

La reacción de Molish es un método cualitativo la cual se utiliza para poder observar la presencia de carbohidratos en una muestra desconocida y a su vez poder determinar si en la muestra se forma de manera inmediata el precipitado con el óxido cúprico (Cu2O) tendríamos un monosacárido y si se tarda un tiempo más prolongado en formar el precipitado se trataría de un disacárido. Por acción del ácido sulfúrico concentrado todos los carbohidratos  se deshidratan y forman compuestos furfúricos (hidroximetilfurfural) que reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (α- naftol). En las muestras de los azúcares de la Galactosa y Fructosa, nos da una reacción positiva, debido a que las muestras de los azúcares están en forma deshidratada, y al  reaccionar con el ácido sulfúrico (H2SO4) se dio la formación del anillo café en la interfase de manera inmediata la cual nos indica la presencia de un carbohidrato

GALACTOSA: luego de agregarle las sustancias se formo un precipitado con dos fases, la primera fase fue de color café claro y la segunda fase fue un anillo transparente en la parte superior, lo cual es prueba positiva

FRUCTOSA: luego de agregarle las sustancias se formo un precipitado con dos fases, la primera fase fue de color café claro y la segunda fase fue un anillo transparente en la parte superior, lo cual es prueba positiva

ALMIDON: luego de agregarle las sustancias se formo un precipitado con dos fases, la primera fase fue de color café claro y la segunda fase fue un anillo transparente en la parte superior, lo cual es prueba positiva.

BEBIDA HIDRATANTE: luego de agregarle las sustancias se formo un precipitado con dos fases, la primera fase fue de color café claro y la segunda fase fue un anillo rojo en la parte superior, lo cual es prueba positiva.

 LIMON: luego de agregarle las sustancias se formo un precipitado pero no hubo formación de fases en las muestras, esta tuvo una coloración amarilla arriba y abajo café oscuro, lo cual es prueba negativa.

 REACCION SELIWANOFF

La prueba de Seliwanoff nos permite identificar si un azúcar está formado estructuralmente por un aldehído o cetona. Nos da positivo este reactivo en base a una cetosa en un azúcar desconocido cuando observamos una coloración roja en el precipitado. En esta prueba de Seliwanoff, se utiliza el ácido clorhídrico en la reacción de deshidratación (del monosacárido) y el resorcinol (1,3-dihidroxibenceno) en la reacción de condensación del derivado del furfural (el hidroximetilfurfural). Esta es una prueba cualitativa; es decir el medio pasa de incoloro a rojo, para las cetohexosas y aldohexosas. 

SACAROSA: El precipitado fue de color salmón, lo cual indica prueba positiva.  

FRUCTOSA: El precipitado fue de color salmón, lo cual indica prueba positiva.  

GALACTOSA: El precipitado fue de color naranja, lo cual indica prueba negativa.

ALMIDON: El precipitado fue de color naranja oscuro y con un anillo café, lo cual indica prueba negativa y contaminada.

BEBIDA HIDRATANTE: El precipitado fue de color salmón, lo cual indica prueba positiva

LIMON: El precipitado fue de color naranja, lo cual indica prueba negativa.

MUESTRAS	R. FELHIG	R. LUGOL	R. MOLISH	R. SELIWANOFF
ALMIDON	Negativa	Positiva	Positiva	Negativa
SACAROSA	Positiva	-	-	Positiva
FRUCTOSA	Positiva	-	Positiva	Positiva
GALACTOSA	Positiva	-	Positiva	Negativa
BEBIDA HIDRATANTE	Positiva	-	Positiva	Positiva
LIMON	Positiva	-	Negativa	Negativa
BEBIDA LIGHT	Negativa	-	-	-

TABLA 1. Resultados de determinación de carbohidratos en diferentes muestras con diferentes reactivos.

CONCLUSIONES 

• Mediante los procedimientos previamente realizados logramos identificar de manera cualitativa comportamientos de cada carbohidrato y la manera como reaccionan, las pruebas de acción reductora nos ayudaron a seleccionar los carbohidratos reductores a partir de la coloración rojiza que obtuvieron y observamos la presencia de la glucosa y la fructosa.
• Se identifico a la fructosa como azúcar no reductor ya que este no posee un carbono anomerico libre gracias a método de Fehling A Y B

ANEXOS 

 Fig 1. Muestras puestas  en baño maría con reactivo Fehling

 Fig 2. muestras de zumo de limon y bebida hidratante en baño maria

 Fig 3. muestras positivas del reactivo Fehling

 Fig 4. muestras positivas de reactivo seliwanoff

Fig 5. muestra positiva del reactivo Fehling

Fig 5.  muestra positiva de reactivo de Molish


BIBLIOGRAFIA 

•       A.O.A.C. Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 12 th edition. W. Horwitz, editor. Washington. USA. 1975. Pp. 458-517.
•      Egan, H.; Kirk, R.S. y R. Sawyer. Analisis Quimico de alimentos de pearson. Compañía Editorial Continental, S.A. México. 1987.
•       Mehlenbacher, V.C. Analisis de grasas y aceites. Editorial URMO. España.1979. 

INTEGRANTES

CAMILA BEDOYA

JULIANA PAEZ

ALEJANDRA LÓPEZ

SEBASTIAN OVIEDO

FABIAN CRUZ 

Estudiantes de Universidad De Cundinamarca Seccional Girardot 

Programa Ingeniería Ambiental

                      III semestre 


EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS ( MÉTODO CUALITATIVO)

RESUMEN 

La extracción del ADN es un proceso importante en la biología molecular, se define como la extracción de ADN de cualquier tipo de célula. Se realizó una práctica en el laboratorio con banano y fresas, con el fin de identificar los ácidos nucleicos. Se necesita romper las membranas de las células y sus núcleos, esto se hace con la sal y el alcohol etílico, dejando el ADN despejado y luego se purifica la solución. Al hacer este procedimiento, el ADN emerge en la superficie por la densidad de la solución; para identificar el ácido nucleico se aplicaron gotas colorante.

ABSTRACT 

The extraction of the ADN is an important process in the molecular biology, is defined as the extraction of ADN of any type of cell. A practice was realized in the laboratory by banana and strawberries, in order to identify the acids nucleicos. It is necessary break the membranes of the cells and his cores, this is done by the salt and the alcohol etílico, leaving the clear ADN and then the solution is purified. On having done this procedure, the ADN emerges in the surface for the density of the solution; to identify the acid nucleico drops applied colouring to themselves.

PALABRAS CLAVE 

• Ácidos nucleicos 
• ADN
• Biología molecular 
• Tejidos
• Biotecnología
• Genética

INTRODUCCIÓN 

El ADN es una molécula formada por dos cadenas de polinucleótidos unidas por puentes de hidrógeno. Los nucleótidos que presenta son: la timina, adenina, guanina y la citosina; las cuales forman los genes, que de acuerdo a la secuencia de orden en que se encuentran determinan las características biológicas de todo ser vivo. Vamos a utilizar alguna fruta macerada para este laboratorio de extracción de ADN con el fin de, en primer lugar romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula, después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN, y así lograr detallar el ADN en la solución acuosa. 

METODOLOGÍA

• En el laboratorio se hizo la extracción de ácidos nucleicos en frutas. Se colocó la fresa en una bolsa ziplock para que no salpicara al triturarla, se maceró hasta formar una consistencia blanda, se realizó con un mortero de porcelana. Se deja reposar aproximadamente 10 minutos. Al obtener la textura deseada, se filtra la mezcla y se verte en un vaso precipitado. El zumo de la fresa contiene proteínas y proteasas (enzimas que rompen los enlaces peptídicos de las proteínas).
• Para disminuir la solubilidad de las proteínas se añade sal para que se separen las proteínas del ADN. El siguiente paso es verter hasta marcar los 6 ml, pero cuidadosamente por la pared del tubo, ya que, al regarlo, mezcla todo y no se obtiene nada. En este paso se obtiene dos fases, al fondo del tubo se observó el zumo de fruta y en la superficie una fase transparente. En la fase transparente, se encontraron unos hilos blancos que son los ácidos nucleicos que se encontraban en la fruta. Para visualizar bien el ADN se añadieron gotas de colorantes en cada tubo.
• Se repitió el mismo procedimiento con el banano teniendo en cuenta realizar bien el procedimiento de filtración y se añade alcohol. 

RESULTADOS Y ANÁLISIS  DE RESULTADOS 

Al mezclar en un vaso de precipitado la solución amortiguadora con la consistencia blanda o zumo de las fresas y el banano no se evidenciaron cambios de estado, pero esto se realizo con el fin de hacer una extracción pura del ADN. Lo cual explica que como el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Del mismo modo lo hace en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo.

Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula. Por esta razón se escoge una fresa madura ya que produce pectinasas y celulasas, enzimas que destruyen la pared celular. La maduración hace el trabajo de destruir la pared celular haciendo más fácil la ruptura de las células y la extracción el ADN cromosómico. Del mismo ocurre con el banano.

Al agregar el alcohol sin mezclar con el zumo de la fresa y el banano se formo una solución viscosa en la fase superior donde se ubico el alcohol. Lo cual responde que el ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

La solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El líquido azul de metileno finalmente deja observar claramente las delgadas fibras del ADN y el alcohol etílico sirve para precipitarlo.

CONCLUSIONES 

• La fase blanca observada en el tubo de ensayo de la muestra de fruta previamente procesada. Era el ADN de dicha muestra con un poco de alcohol etílico frío.
• La extración del ADN se hace con el fin de reconocer los ácidos nucleicos de frutas o vegetales entre otras sustancias. 

ANEXOS